一株海洋微藻的鉴定及其原生质体制备条件优化

作者：张莉; 丁涓; 郝宇晨; 叶城; 蒲洋^*

来源：中国生物工程杂志, 2018, 38(11): 42-50.

DOI：10.13523/j.cb.20181106

• 分子鉴定
• 原生质体制备
• 响应面优化

从烟台海滨水域分离出一株海洋单细胞微藻。通过形态学鉴定和18S r DNA基因序列分析确定该株真核微藻属于四爿藻属(Tetraselmis sp.),命名为138号藻种。利用Central Composite法的Box-Behnken实验设计优化了此藻株的原生质体备条件。获得了以原生质体制备率为目标函数的三元二次回归方程:Y1=88. 30-0. 19X1+2. 44X2+2. 28X3-0. 95X1X2-3. 13X1X3+3. 78X2X3-9. 85X12-7. 95X22-7. 22X32。得到最优制备条件:混合酶比例纤维素酶∶果胶酶为5∶2;混合酶浓度为4. 5%(纤维素酶浓度为2. 7%,果胶酶浓度为1. 8%);缓冲液pH为6. 4,最高理论制备率81. 5%。经过3次平行试验,实际得到的原生质体制备率为80. 5%,与模型预测值的误差为1. 24%。绿色荧光蛋白报告基因瞬时表达检测了所制备原生质体的转化能力。

• 单位
  鲁东大学; 生命科学学院