高效液相色谱和液质联用技术用于人干扰素α2b中甲硫氨酸氧化的研究

作者：尹红锐; 张颖; **明; 陈钢; 邵泓^*

来源：药物分析杂志, 2021, 41(07): 1203-1208.

DOI：10.16155/j.0254-1793.2021.07.11

• 人干扰素α2b
• 细胞因子
• 甲硫氨酸
• 氧化
• 高效液相色谱
• 超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法

目的:采用高效液相色谱(HPLC)、超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)技术对人干扰素α2b中甲硫氨酸的氧化情况进行研究。方法:HPLC法采用Jupiter 5U C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm,300?),流动相A为乙腈-水-三氟乙酸(300∶700∶2),流动相B为乙腈-水-三氟乙酸(800∶200∶2),梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长210 nm。UPLC-Q-TOF MS法采用BEH300C4色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm)和BEH300 C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm),流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.2 mL·min-1;采用Q-TOF MS的电喷雾正离子模式,相对分子质量测定时采用MS模式进行扫描,氨基酸序列测定时采用MSE模式进行扫描。结果:对2家企业6批人干扰素原液进行了测定,2家企业产品中甲硫氨酸氧化比例差别较大,其中一家企业氧化比例较高,第16位的甲硫氨酸氧化比例达到了99%以上。结论:在人干扰素α2b相关制品中增加氧化杂质的控制是有必要的。本研究也为企业进行相关研究提供了思路。