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摘要
目的观察补肾活血方对AGEs/缺氧条件下视网膜Müller细胞血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法应用改进的酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞,将其分为正常对照组(NC组)、正常中药干预组(NCM组)、低AGEs组(LA组)、高AGEs组(HA组)、低AGEs中药干预组(LAM组)、高AGEs中药干预组(HAM组)、模拟缺氧组(SH组)、模拟缺氧中药干预组(SHM组),用酶联免疫吸附法(ELISA)对相关干预条件下体外培养视网膜Müller细胞上清液进行VEGF及PEDF含量的测定。结果 (1)VEGF表达量:(1)24、48、72 h时,SH组、LA组、HA组视网膜Müller细胞VEGF表达量均高于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);HA组、SH组表达量均高于LA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)24 h时,SH组表达量高于HA组;48 h时,SH组表达量低于HA组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)除72 h NCM组VEGF表达量与NC组相比,差异无统计学意义(P>0.05)外,其余时段有中药干预组的表达量均较对应无中药干预组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)SH组、LA组、HA组、LAM组、HAM组、SHM组细胞48、72 h时VEGF表达量均较前一时段增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)PEDF表达量:(1)SH组、LA组、HA组各个时段视网膜Müller细胞PEDF表达量较NC组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)24、72 h时,HA组、SH组PEDF表达量较LA组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)24h时,SH组PEDF表达量较HA组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)24、72 h NCM组、LAM组,24、48、72 h HAM组,24 h SHM组视网膜Müller细胞PEDF表达量均较对应无中药干预组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)LA组、HA组、SH组、LAM组、HAM组、SHM组48、72 h时细胞PEDF表达量均较前一时段降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)VEGF/PEDF比值:(1)NC组、NCM组各时段其比值几乎相同,表明视网膜Müller细胞VEGF与PEDF的量处于相对平衡的状态。(2)LA组、HA组、SH组、各时间点其比值较NC组均有不同程度的升高。(3)LA组、HA组、SH组比值均随着时间的延长而升高;LAM组、HAM组、SHM组比值均随着时间的延长而升高,但较之LA组、HA组、SH组,其升高幅度降低。结论 (1)AGEs以及缺氧均可导致视网膜Müller细胞分泌VEGF增加、PEDF减少,并且这种改变在HA组比LA组更明显。(2)在AGEs以及缺氧条件下,补肾活血中药复方含药血清可降低视网膜Müller细胞VEGF的表达,提高PEDF蛋白的表达,这可能是补肾活血法防治糖尿病视网膜病变(DR)的药物干预途径之一。(3)正常状态下视网膜Müller细胞的VEGF与PEDF呈动态平衡;AGEs以及缺氧条件下不仅使视网膜Müller细胞VEGF与PEDF的动态平衡均被打破,并且AGEs对视网膜Müller细胞VEGF与PEDF动态平衡的损害程度与AGEs浓度有关。(4)补肾活血中药含药血清可减轻在AGEs以及缺氧条件下VEGF与PEDF的不平衡,这可能是其防治DR的一个重要作用机制。
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