多重实时荧光PCR鉴别欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV方法的建立

作者：温青娜周玲玲申红杨菊凤林祥群

来源：动物医学进展, 2015, (06): 8.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2015.06.004

• 欧洲型
• 美洲型
• 高致病性
• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 多重实时荧光PCR

建立鉴别美洲型、欧洲型和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重实时荧光PCR方法。根据欧洲型N基因、美洲型M基因和高致病性nsp2基因的各自保守序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针，通过优化反应的体系和扩增条件，建立了能够检测欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV的多重实时荧光PCR的方法。该方法的重复试验表明其批内和批间的变异系数最高值分别为1.84%和1.76%；灵敏性试验表明其检测下限为10　copies/μL；特异性试验表明与其他一些猪源病毒无交叉反应，具有良好的特异性；临床试验表明，该方法能够快速准确的检测出临床组织样本中美洲型及高致病性PRRSV的核酸；此外，本研究用欧洲型PRRSV质粒进一步验证了该方法可以检测出欧洲型的目的基因。该检测方法的建立为不同类型的PRRSV快速诊断提供了有效手段，可用于猪繁殖与呼吸综合征疫情的监测及防控。

• 单位
  石河子大学; 河南科技学院; 广东中大南海海洋生物技术工程中心有限公司