m6A甲基转移酶METTL3介导miR-127调控非小细胞肺癌细胞系自噬的机制研究

作者：伍义文; 曹健斌; 黄维佳; 何凌云

来源：现代检验医学杂志, 2022, 37(02): 12-32.

• 非小细胞肺癌细胞
• 甲基转移酶3
• miR-127
• 自噬

目的 分析N6甲基腺苷（m6A）甲基转移酶3(methyltransferase-like 3, METTL3)和miR-127在非小细胞肺癌（non small cell lung cancer cells, NSCLC）细胞系中的表达及其相关性，并探究METTL3介导miR-127调控非小细胞肺癌自噬的作用机制。方法 采用qRT-PCR法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B与非小细胞肺癌细胞HCC827,A549和H460中METTL3和miR-127的表达水平；通过Linked Domics数据库筛选出肺癌中与miR-127共表达的基因，并分析METTL3和miR-127之间的相关性；选择H460细胞传代培养至对数生长期后，将浓度接近的细胞随机分为三组，分别转染METTL3-siR,NC-siR及Control，验证转染后H460细胞中METTL3和miR-127表达；通过吖啶橙染色，Lyso-Tracker Red染色观察METTL3对细胞自噬的影响；利用Western blot检测PTEN,AKT,mTOR,ULK1,Beclin-1等自噬相关蛋白的表达。结果 非小细胞肺癌细胞HCC827,A549,H460中METTL3相对表达分别为1.35±0.17,1.54±0.11和1.78±0.21，明显高于正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达水平（0.91±0.11），差异有统计学意义(F=34.037,P=0.002)。非小细胞肺癌细胞HCC827,A549,H460中miR-127相对表达分别为1.56±0.21,1.85±0.19和2.11±0.25，较正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达（1.02±0.20）亦显著升高，差异有统计学意义（F=28.152,P=0.005）。肺癌中METTL3与miR-127共同表达呈正相关性（r=0.452,P <0.001）。METTL3-siR组细胞中METTL3表达水平（0.61±0.15）较Control组（1.71±0.28）和NC-siR组（1.65±0.19）显著降低，差异有统计学意义（F=78.357,P <0.001）。METTL3-siR组细胞中miR-127表达水平（0.48±0.15）较Control组（2.02±0.33）和NC-siR组（1.97±0.25）亦显著下降，差异有统计学意义（F=105.216,P <0.001）；吖啶橙和Lyso-Tracker Red染色分别观察到METTL3-siR组细胞酸性自噬小泡增多，自噬溶酶体数量也明显增加。与Control组和NC-siR组相比，METTL3-siR组细胞中PTEN,ULK1,Beclin1蛋白表达水平显著升高，差异均有统计学意义（F=62.420～175.615，均P<0.001）;p-AKT和p-mTOR表达水平显著下降，差异均有统计学意义（F=148.781,87.147，均P<0.001）。结论 METTL3和miR-127在非小细胞肺癌细胞系中均呈高表达，且它们之间呈正相关性，沉默METTL3基因可以抑制miR-127表达，促进非小细胞肺癌H460细胞发生自噬，其调控机制可能与PTEN/AKT/mTOR通路有关。

• 单位
  柳州市人民医院