TGF-β1诱导肌成纤维细胞转化相关调节蛋白的蛋白组学筛选与验证

作者：耿菲; 陈莹莹; 姚婧昕; 李世峰; 高学敏; 魏中秋; 徐洪; 杨方^*

来源：环境与健康杂志, 2020, 37(08): 697-753.

DOI：10.16241/j.cnki.1001-5914.2020.08.010

• 双向凝胶电泳
• Rho GDP解离抑制因子α
• 肌成纤维细胞
• 矽肺

目的探讨双向凝胶电泳技术筛选及鉴定转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的差异蛋白质。方法将大鼠原代肺成纤维细胞分为对照组及5 ng/ml TGF-β1诱导组(1、24h),以双向凝胶电泳筛选差异蛋白,分离并进行质谱鉴定。以Western blot法、免疫荧光染色、免疫组织染色对5 ng/ml TGF-β1诱导(6～48 h)肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中差异蛋白[Rho GDP解离抑制因子α(Rho GDIα)]进行验证并对矽肺纤维化相关指标[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型前胶原(pro collagen-I)蛋白]进行检测。通过建立矽肺大鼠模型对肺组织中差异蛋白进行验证并对矽肺纤维化相关指标进行检测。结果经蛋白组学技术筛选出TGF-β1诱导的大鼠原代肺成纤维细胞的9个差异蛋白,与对照组相比,TGF-β1诱导组有8个蛋白点表达上调,1个蛋白点表达下调,其中Rho GDIα表达上调(P<0.05)。Western blot及免疫组化结果显示,与对照组相比,肺成纤维细胞Rho GDIα、α-SMA和pro collagen-I蛋白水平随TGF-β1诱导时间延长而增加(P<0.05),免疫荧光染色显示Rho GDIα和α-SMA蛋白共表达。动式染尘大鼠肺组织Rho GDIα蛋白表达随染尘时间延长而增加(P<0.05)。结论双向凝胶电泳技术对TGF-β1诱导后大鼠原代肺成纤维细胞表达的差异蛋白进行了筛选,Rho GDIα可能与肌成纤维细胞转化密切相关。

• 单位
  华北理工大学; 公共卫生学院; 基础医学院