Cbl-b shRNA稳定转染乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建

作者：张凌云; 石晶; 滕月娥; 张晔; 曲秀娟; 刘云鹏

来源：山东医药, 2011, 51(52): 31-33.

DOI：10.3969/j.issn.1002-266X.2011.52.016

• 乳腺肿瘤
• Cbl-b
• 短发夹环RNA
• MDA-MB-231
• 转染 breast cancer
• Cbl-b
• short hairpin RNA
• MDA-MB-231
• transfection

目的构建靶向Cbl-b基因的短发夹环RNA(shRNA)真核质粒表达载体,建立Cbl-b shRNA稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,为探讨Cbl-b的生物学功能奠定基础。方法设计Cbl-b shRNA序列BLAST进行同源性分析。化学合成法合成shRNA序列,将配对的单链合成双链,以T4连接酶连接于pSilencerTM 4.1-CMV表达载体,加入感受态细胞。将菌液涂布于含有氨苄青霉素的LB平板,筛选阳性菌落,测序确认后进行大量复制、扩增,提取重组质粒。脂质体法将上述质粒转染至MDA-MB-231细胞中,G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。结果 DNA测序证实靶...

• 单位
  中国医科大学附属第一医院