本发明公开了一种天然釉原蛋白组分的分离纯化方法,针对天然釉原蛋白组分团聚性强、难以纯化分离的问题,本发明利用反相液相色谱的色谱制度,经过对少量样品的梯度洗脱和等度洗脱分析,确定目标蛋白的最有效洗脱浓度范围并设计出梯度洗脱和等度洗脱结合的洗脱制度,从粗提釉原蛋白中一步分离纯化出多种釉原蛋白目标组分。本发明具有过程简单,成本低,产品纯度高等特点,可用于大规模纯化制备多种釉原蛋白组分。