稳定表达TAT融合蛋白的哺乳动物细胞系的建立

作者：秦成峰; 张强; 赵慧; 朱武洋; 李晓峰; 陈水平; 秦鄂德

来源：Y200710011, 2007, 32(10): 1031-1033.

DOI：10.3321/j.issn:0577-7402.2007.10.009

• 蛋白转导
• 融合蛋白质类
• TAT
• 细胞系 protein transduction
• fusion proteins
• TAT
• cell line

目的建立能够稳定分泌表达TAT融合蛋白的哺乳动物细胞系。方法依次将合成的编码TAT蛋白转导域和EG-FP的DNA片段插入分泌型真核表达载体pSecTag2A,构建编码TAT-EGFP融合蛋白的重组质粒,转染Vero细胞后,经Zeocin筛选建系,通过荧光显微镜和免疫印迹鉴定表达的蛋白,MTT分析细胞毒性,荧光观察蛋白转导活性。结果成功获得了稳定分泌表达TAT-EGFP融合蛋白的工程细胞系,表达的TAT融合蛋白具有良好的蛋白转导活性。结论建立的哺乳动物细胞表达系统能够持续产生具有蛋白转导活性的TAT融合蛋白,为相关应用研究奠定了基础。

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院