人Ⅰ型前胶原基因反义寡核苷酸抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成

作者：袁即山; 利天增; 祁少海

来源：中国修复重建外科杂志, 2009, 23(06): 713-717.

• Ⅰ型前胶原基因
• 反义寡核苷酸
• 增生性瘢痕
• 胶原

目的探讨阳离子脂质体介导Ⅰ型前胶原基因(ColⅠA1)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyneucleotide,ASODN)转染对人增生性瘢痕成纤维细胞ColⅠA1表达的影响。方法取患者自愿捐赠瘢痕组织,采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞并传代。于6孔板内按32.25×104个/孔的密度接种第4代细胞,根据转染液不同分为4组:A组为脂质体加ColⅠA1 ASODN,B组为ColⅠA1 ASODN,C组为脂质体,D组为空白对照。转染后8h,1、2、3、4d分别提取细胞总RNA,行RT-PCR后测定ColⅠA1 mRNA表达量;胃酶消化法提取ECM中ColⅠA1蛋白,ELISA测定其浓度。结果扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测显示条带清晰,无杂带、明显的引物二聚体及拖尾现象。ColⅠA1 mRNA相对表达量:转染后8h,A组小于B、C、D组,B、C组小于D组,比较差异均有统计学意义(P<0.05);B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05);转染后1d,A、B组小于C、D组(P<0.05),A、B组间和C、D组间比较差异无统计学意义(P>0.05);转染后2d,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);转染后3、4d,A组小于B、C、D组,B组小于C、D组(P<0.05),C、D组间差异无统计学意义(P>0.05)。ColⅠ蛋白浓度:转染后8h,A组小于B、C、D组,B、C组小于D组,比较差异均有统计学意义(P<0.05),B、C组间差异无统计学意义(P>0.05);转染后1d,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);转染后2、3、4d,A、B组小于C、D组,C组小于D组(P<0.05),A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论ColⅠA1 ASODN抑制ColⅠA1 mRNA和蛋白表达;阳离子脂质体作为载体有增强效果,促进ASODN进入细胞并在核内分布。

• 单位
  中山大学附属第一医院; 江苏大学附属人民医院