猪圆环病毒2型(PCV2) Cap基因原核表达及抗血清制备

作者：姜宇航; 宋利娜; 许汪; 杜寿文; 陈竞; 付婷婷; 郝鹏飞; 李秋璇; 金宁一^*; 李昌^*

来源：中国兽医学报, 2020, 40(02): 237-241.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.02.03

• PCV2
• Cap基因
• 原核表达
• 小鼠阳性血清

Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的重要结构蛋白,可以实现诱导机体免疫保护。以本实验室分离保存的PCV2毒株的Cap基因作为模板,设计特异性引物进行PCR扩增,并将该PCR产物连接至原核表达载体pET-28a上,获得重组质粒pET-28a-PCV2 Cap。将验证正确的菌种接入HB-pET自诱导培养基,过夜培养,SDS-PAGE及Western blot验证其表达,可获得28 000左右的目的蛋白。利用亲和层析技术纯化PCV2 Cap蛋白,免疫BALB/c小鼠获得小鼠阳性血清,通过ELISA方法检测其效价,并用Western blot验证其活性。结果显示,本试验成功应用大肠杆菌表达了PCV2 Cap蛋白,表达的蛋白具有免疫原性,并获得小鼠阳性血清,为PCV2 Cap蛋白的功能研究、鉴定、抗体及疫苗研制和病原检测奠定理论基础。

• 单位
  动物科技学院; 吉林农业大学