菊芋HtCCR1基因的克隆与表达分析

作者：张新业; 苏彦苹; 乔洁; 王聪艳; 李文静^*

来源：西北植物学报, 2019, 39(11): 1919-1928.

• 菊芋
• 肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)
• 原核表达
• 荧光定量PCR
• 胁迫处理

肉桂酰辅酶A还原酶(cinnamoyl-CoA reductase,CCR)是木质素合成代谢的关键酶。该研究以菊芋(Helianthus tuberosus L.)‘廊芋8号’为材料,克隆到1个菊芋的CCR基因,命名为HtCCR1(GenBank登录号为MN205540),其开放阅读框(ORF)长975bp,编码324个氨基酸,其中含有FRSDRe保守结构域。系统进化分析表明,HtCCR1与向日葵CCR蛋白(XP021989763.1)共聚于一支,二者亲缘关系最近。实时定量PCR分析表明,HtCCR1基因在菊芋茎和叶中的表达量显著高于在根和块茎中;盐(150mmol·L-1 NaCl)胁迫处理6、12和24h后,处理组HtCCR1基因的表达量均显著高于对照组;干旱(20%PEG6000)胁迫6和12h后,处理组HtCCR1基因的表达较对照组均显著上调。成功构建pET-28a-HtCCR1原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导出了符合预期大小的蛋白,表明HtCCR1重组蛋白已成功表达。该研究结果为进一步研究HtCCR1基因的功能及利用基因工程手段调节菊芋中木质素的生物合成奠定了基础。

• 单位
  廊坊师范学院; 生命科学学院