金黄色葡萄球菌PGRP的原核表达及生物信息学分析

作者：孟圆; 刘思雨; 马秋虹; 王运铎; 杨光; 孙文平; 罗红

来源：中国病原生物学杂志, 2017, 12(11): 1062-1065.

DOI：10.13350/j.cjpb.171107

• 金黄色葡萄球菌
• 自溶素
• 肽聚糖识别蛋白

目的构建金黄色葡萄球菌PGRP基因片段的原核表达,对表达产物进行生物信息学分析。方法根据GenBank中收录的金黄色葡萄自溶素(autolysin,AtlA)基因序列(AC:D17366),设计其中pgrp基因片段的特异性引物,并通过NCBI Blast,在收录的所有金黄色葡萄球菌菌株中对相应的基因序列进行保守性分析。提取金黄色葡萄球菌(ATCC25923)的全基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增pgrp基因序列,构建该基因的克隆载体pEASY-T1/pgrp及表达载体pET-32а(+)/pgrp,通过IPTG诱导表达重组蛋白PGRP。利用生物信息学相关软件(ProtParam、ProtScale、SignalP 4.1server、Signal-3L、TMpred、DAS、NetPhos 2.0Server)分析rPGRP蛋白的理化性质、信号肽、跨膜域及磷酸化位点等生物学信息。结果成功构建重组质粒pEASY-T1/pgrp及表达载体pET-32а(+)/pgrp,构建的克隆质粒测序结果与GenBank中金黄色葡萄自溶素AtlA基因序列(AC:D17366)的相似性为95.7%。获得的rPGRP分子质量单位约为20×103。生物信息学方法分析rPGRP片段由155个氨基酸组成,分子质量单位(Mr)为17.440 95×103,理论pI为5.45,是一种稳定的亲水性蛋白,该蛋白无信号肽且为非跨膜蛋白,属于胞外蛋白。结论成功构建金黄色葡萄球菌自溶素酰胺酶PGRP的原核表达系统。获得的约20×103肽聚糖识别蛋白片段为稳定的亲水性胞外蛋白。

• 单位
  淄博市中心医院; 大连医科大学; 大连市中心医院