鸭坦布苏病毒E蛋白Domain Ⅲ单克隆抗体胶体金试纸条的创制及应用

作者：阚莹; 张淼; 卢奇; 吕炫; 于胜祖; 王习强; 姜雅倩; 王蓓; 朱英奇; 王晴; 王桂军^*

来源：中国动物检疫, 2023, 40(02): 131-138.

• 鸭坦布苏病毒
• 胶体金
• 单克隆抗体
• 免疫层析试纸条

为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒（DTMUV）的方法，以2株（B9D7B8G10和B9D10C7株）抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液，利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进行纯化并鉴定；以纯化的B9D7B8G10株单克隆抗体作为标记抗体，通过调节单克隆抗体浓度与pH确定胶体金探针最佳结合条件；同时，在硝酸纤维素膜（NC膜）检测带包被纯化的B9D10C7株单克隆抗体，质控带包被山羊抗小鼠IgG抗体，建立检测DTMUV胶体金免疫层析试纸条；成功建立试纸条后，对试纸条敏感性、特异性、重复性和稳定性进行检测，并与RT-PCR检测方法进行比较，对200份临床疑似感染样品进行检测。结果显示：制备的胶体金试纸条在15 min内即可完成检测，最低检测稀释度为1:50，且不与鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅星状病毒、禽白血病病毒发生交叉反应；应用试纸条和RT-PCR方法分别对200份临床疑似样品进行检测，两者符合率达98%。结果表明，制备的胶体金试纸条敏感性高、特异性强、稳定性好、重复性好，为DTMUV的快速检测提供了一种实用检测技术。

• 单位
  安徽农业大学; 动物科技学院