E8.5-E12.5大鼠胚胎整体原位杂交技术

作者：张吉霞; 蔡玉瑾; 谢耀丽; 李海荣; 乔从进; 崔慧林

来源：神经解剖学杂志, 2013, (03): 296-300.

• 整体原位杂交
• 寡核苷酸探针
• DGKζ
• 大鼠胚胎 whole mount in situ hybridization
• oligonucleotide probe
• diacylglycerol kinase ζ
• rat embryos

目的:通过优化实验条件,建立大鼠胚胎整体原位杂交方法。方法:E8.5-E10.5大鼠胚胎4%多聚甲醛固定6 h,不经蛋白酶K消化;E11.5-E12.5胚胎4%多聚甲醛固定过夜,蛋白酶K系列稀释实验确定消化浓度和时间。E8.5-E12.5胚胎预杂交2 h,地高辛标记的甘油二酯激酶ζ(DGKζ)寡核苷酸探针杂交24 h,山羊血清封闭2.5～3 h,地高辛抗体4℃过夜,冷TBST和NTMT漂洗1～2 h,NBT/BCIP避光显色。应用免疫组织化学方法观察DGKζ在E12.5大鼠胚胎组织的表达。结果:DGKζ在不同胚龄大鼠胚胎均有清晰的杂交信号,主要集中在神经系统;E12.5大鼠胚胎脑泡、背根神经节...

• 单位
  山西医科大学; 西山煤电（集团）有限责任公司