大蒜ISSR-PCR反应体系的正交优化建立

作者：李雪; 韩曙; 杨正安; 张映钧; 杨嵩明; 赵德安; 车吉星; 李志萌

来源：中国农学通报, 2013, (10): 126-131.

• 大蒜
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为探寻出更适宜大蒜的ISSR反应体系,以‘弥渡紫皮’大蒜为试材,对ISSR-PCR反应体系中的5个主要因素(dNTPs、Taq酶、Mg2+、引物浓度、模板DNA)在4个不同水平上进行正交设计L16(45)优化。结果表明,含10×PCRBuffer2.5μL、2.5mmol/LMg2+、0.15mmol/LdNTPs、1.5UTaqDNA聚合酶、0.4μmol/L引物、20ng/μL模扳DNA的25μL反应体系为大蒜的最佳反应体系。利用新建立的反应体系对20个不同大蒜品种进行扩增,具有极好的稳定性和重复性。

• 单位
  云南农业大学