SPARC基因RNAi慢病毒载体的构建及其在SKM-1细胞中的表达

作者：罗静; 叶兴伟; 蒋文; 周洪静; 肖青; 杨泽松; 刘林; 王利

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2012, (05): 466-469.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006408

• SPARC
• RNA干扰
• 慢病毒
• SKM-1 SPARC
• RNA interference
• lentivirus
• SKM-1

目的:构建SPARC基因RNAi慢病毒载体获得稳定产毒的细胞,并观察其对人MDS细胞株SKM-1细胞的转染效率及其对SPARC基因的抑制效率。方法:针对已经筛选确定的SPARC基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生GC-shSPARC慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆并进行测序鉴定。用GC-shSPARC、pHelper1.0和pHelper 2.0载体共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度,并将获得的重组慢病毒GC-shSPARC转染SKM-1...

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院