苓桂术甘汤治疗膜迷路积水豚鼠P38MAPK信号通路实验研究

作者：冷辉; 刘欣旭; 马贤德; 曲中源; 张琦

来源：辽宁中医药大学学报, 2020, 22(11): 12-17.

DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2020.11.004

• 苓桂术甘汤
• 梅尼埃病
• P38MAPK
• ATF-2

目的探索P38MAPK信号通路与苓桂术甘汤治疗膜迷路积水豚鼠的关联性。方法随机将36只健康红目豚鼠随机分为空白组、模型组、苓桂组及苓桂加α-LA组,每组各9只豚鼠(18耳),除空白组外,其余3组采用腹腔注射醋酸去氨加压素方法造模,6μg·kg-1·d-1,连续注射10 d。造模成功后,苓桂组豚鼠每日予苓桂术甘汤2.79 g/kg灌胃,苓桂加α-LA组每日予2.79 g/kg及α-LA 46.5 mg/kg同时灌胃,空白组及模型组以1 mL生理盐水灌胃。各组正常饲养,7 d后取材。采用HE染色法观察各组豚鼠耳蜗积水情况,免疫组化、荧光定量PCR方法以及Western-Blot法观察P38MAPK、p-P38MAPK、ATF-2蛋白在各组豚鼠耳蜗的表达情况。选用SPSS19.0软件统计分析各实验结果,探讨P38MAPK信号通路与苓桂术甘汤治疗梅尼埃病的关联性。结果蜗管面积与耳蜗总面积比值:模型组、苓桂组、苓桂加α-LA组与空白组比较均增加(P<0.01);苓桂组与模型组比较减小(P<0.01);苓桂加α-LA组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);苓桂加α-LA组比苓桂组增加(P<0.01)。免疫组化方法观察P38MAPK、p-P38MAPK、ATF-2蛋白在豚鼠耳蜗表达情况:与空白组比较,模型组、苓桂组、苓桂+α-LA组P38MAPK、p-P38MAPK、ATF-2蛋白表达均下调(P<0.01);与模型组比较,苓桂组P38MAPK、p-P38MAPK、ATF-2蛋白以及苓桂+α-LA组p-P38MAPK蛋白表达水平上调(P<0.01);与苓桂组比较,苓桂+α-LA组P38MAPK、p-P38MAPK、ATF-2蛋白表达均下调(P<0.01)。荧光定量PCR方法观察P38MAPK mRNA/p-P38MAPK mRNA、ATF-2 mRNA在豚鼠耳蜗表达情况:与空白组比较,模型组、苓桂组P38MAPK mRNA/p-P38MAPK mRNA、ATF-2 mRNA表达水平下调(P<0.01),苓桂+α-LA组ATF-2 mRNA表达水平下调(P<0.01);与模型组比较,苓桂组、苓桂+α-LA组P38MAPK mRNA/p-P38MAPK mRNA、苓桂组ATF-2 mRNA表达水平上调(P<0.01);与苓桂组比较,苓桂+α-LA组P38MAPK mRNA/p-P38MAPK mRNA、ATF-2 mRNA表达下调(P<0.01)。Western-Blot方法观察P38MAPK、p-P38MAPK、ATF-2蛋白在耳蜗表达情况:与空白组比较,模型组、苓桂组、苓桂+α-LA组P38MAPK、p-P38MAPK、ATF-2蛋白表达均下调(P<0.01);与模型组比较,苓桂组、苓桂+α-LA组P38MAPK、p-P38MAPK、ATF-2蛋白表达水平上调(P<0.01);与苓桂组比较,苓桂+α-LA组P38MAPK、p-P38MAPK、ATF-2蛋白表达均下调(P<0.01)。结论苓桂术甘汤可在一定程度上减轻豚鼠膜迷路积水。苓桂术甘汤治疗梅尼埃病可能是通过P38MAPK信号通路实现的。α-LA可能抑制P38MAPK通路的活性,进而减少氧化应激反应的发生。

• 单位
  辽宁中医药大学; 辽宁中医药大学附属医院