小鼠骨髓来源树突状细胞模型的建立及功能鉴定

作者：纪俊莉; 梁笑星; 李小萌; 杨姿萱; 周宇泽; 凌一绮; 郝艳梅^*

来源：山西医科大学学报, 2023, 54(09): 1247-1253.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2023.09.012

• 股骨
• 胫骨
• 骨髓细胞
• 诱导培养
• 树突状细胞
• 脂多糖
• 表面标志物

目的 通过快速高效获取小鼠骨髓有核细胞，建立小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow dendritic cell, BMDC)模型，并对BMDC进行表面特异性标志物及功能鉴定。方法 利用小鼠股骨和胫骨肌肉群分布的位置特点，快速游离出C57BL/6雄性小鼠的股骨和胫骨，获取骨髓细胞，使用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant murine granulocyte-macrophage colony stimulating factor, rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素4(recombinant murine interleukin-4,rmIL-4)诱导培养成BMDC。光镜下观察细胞形态，流式细胞术检测BMDC的特异标志物CD11c,进行纯度鉴定。将BMDC分为2组：对照组和LPS组(1μg/ml),采用流式细胞术检测特异性标志物CD11c、CD86、CD80、CD40和MHCⅡ分子，CCK-8实验检测BMDC对脾脏淋巴细胞增殖能力的影响，qRT-PCR和Western blot检测BMDC中NF-κB的表达情况，进行功能鉴定。结果 诱导培养7 d,镜下观察BMDC具有树突状突起的典型形态，CD11c表达可达97.4%,表明BMDC纯度能够满足后续实验需要。流式细胞术结果显示，与对照组比较，LPS组BMDC中特异性标志物CD86、CD80、CD40和MHCⅡ分子的荧光强度和阳性率显著增强(P<0.01)。CCK-8实验结果显示，与对照组比较，LPS组BMDC刺激淋巴细胞增殖的能力明显增强(P<0.01)。qRT-PCR结果显示，与对照组比较，LPS组BMDC中NF-κB的表达上调(P<0.001)。Western blot结果表明，与对照组比较，LPS组BMDC内p-NF-κB的表达上调(P<0.01)。结论 成功建立了简单高效的体外诱导培养的BMDC模型，为DC免疫功能的基础研究和转化应用奠定了实验基础。

• 单位
  蚌埠医学院