Sestrin2蛋白通过Nrf2/HO-1信号通路保护大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤

作者：刘英存; 李飞; 黄毅; 司良毅^*

来源：第三军医大学学报, 2020, 42(15): 1536-1542.

DOI：10.16016/j.1000-5404.202003201

• Sestrin2蛋白
• 心肌缺氧复氧损伤
• 凋亡

目的探讨Sestrin2蛋白在大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其机制。方法体外培养H9C2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。细胞分为对照组、缺氧4 h组、复氧2 h组和复氧4 h组。采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术结合Annexin V/7AAD荧光染色检测细胞凋亡;微量酶标法检测心肌细胞损伤标记物乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平。构建针对Sestrin2蛋白沉默的siRNA与其阴性对照(si-NC),利用脂质体转染法导入H9C2心肌细胞,后将H9C2心肌细胞分为对照组、缺氧4 h+si-NC组(阴性对照组)、缺氧4 h+siRNA组、复氧4 h+si-NC(阴性对照组)、复氧4 h+siRNA组。Western blot检测Sestrin2蛋白的表达;流式细胞术结合Annexin V/7AAD荧光染色检测细胞凋亡;Western blot检测Sestrin2蛋白、核转录相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)及血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达。结果与对照组比较,复氧4 h组细胞存活率降低(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.05),LDH水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,Sestrin2蛋白表达在缺氧组和缺氧复氧组均显著增高(P<0.01),且缺氧复氧组Sestrin2蛋白表达量显著高于单纯缺氧组(P<0.01)。转染siRNA特异有效地下调了Sestrin2蛋白表达(P<0.05),同时细胞凋亡率显著增加(P<0.05),Nrf2蛋白表达降低(P<0.01),HO-1蛋白表达降低(P<0.05)。结论 Sestrin2蛋白对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1相关信号通路有关。

• 单位
  第三军医大学; 重庆医科大学; 中国人民解放军陆军军医大学; 基础医学院