重组酶介导核酸等温扩增荧光法用于日本血吸虫感染性钉螺早期检测的研究

作者：董萱; 熊春蓉; 李婷; 赵松; 张键锋; 李伟; 杨坤^*

来源：中国病原生物学杂志, 2019, 14(11): 1245-1249.

DOI：10.13350/j.cjpb.191102

• 血吸虫,日本
• 重组酶介导的核酸等温扩增(RAA)
• 感染性钉螺
• 早期
• 核酸检测

目的探索重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplification,RAA)荧光法用于日本血吸虫感染性钉螺早期检测的可行性。方法用日本血吸虫毛蚴人工感染200只湖北钉螺,随机分为阳性对照组和实验组各100只,另取100只未感染钉螺作为阴性对照组。将阳性对照组钉螺饲养至70 d,通过逸蚴法观察感染情况并计算阳性率。实验组钉螺分别在3 h以及5、20、40、70 d随机取20只,压碎镜检,同时提取钉螺软体DNA,进行荧光RAA法检测,获得不同时间点的阳性率,并与阳性对照组相比较。通过二代测序法对RAA检测阳性的特异性扩增产物进行测序鉴定。结果毛蚴感染后3 h、5 d、20 d、40 d、70 d实验组钉螺RAA法检测阳性率分别为60%、60%、65%、60%、70%,压碎镜检的阳性率分别为0、0、0、15%、65%,除70 d外其余时间点两种检测方法的阳性率差异均有统计学(χ■=17.14,χ■=17.14,χ220 d=19.26,χ■=8.64,均P<0.01);各时间点间阳性率差异无统计学意义(χ2=0.68,P>0.05),各时间点阳性率与阳性对照组阳性率64.6%比较差异均无统计学意义。RAA扩增产物经二代测序后与数据库比对,确认为血吸虫特异性基因片段。结论 RAA荧光法敏感、特异,可用于日本血吸虫感染性钉螺的早期检测。

• 单位
  江苏省血吸虫病防治研究所