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摘要
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌感染引起的人畜共患传染病，对养殖业的发展和人类的公共健康安全有着严重的危害。由VirB编码的Ⅳ型分泌系统（T4SS）为布鲁氏菌重要的毒力因子，布鲁氏菌侵染细胞后，吞噬体酸化被证实是VirB启动T4SS的主要信号，利用mCherry红色荧光蛋白作为报告基因，构建可以在体外酸性环境中检测VirB启动子活性的质粒，对于研究布鲁氏菌毒力基因的表达具有重要意义。以pBE-1质粒为骨架，构建质粒pBE-1-VirB-mCherry，以pBE-1-ptrc-mCherry质粒为阳性对照，通过电穿孔法转入布鲁氏菌S2株中，构建工程菌株S2(pBE-1-ptrc-mCherry)和S2(pBE-1-VirB-mCherry)。体外酸性环境下诱导工程菌株S2(pBE-1-VirB-mCherry)，结果显示，mCherry荧光蛋白可以精准地报告VirB启动子的活性。结果表明，构建了利用mCherry荧光蛋白报告布鲁氏菌VirB启动子活性的质粒，并验证mCherry荧光蛋白可以精准反应布鲁氏菌VirB启动子在体外的活性，为研究布鲁氏菌毒力基因，揭示其Ⅳ型分泌系统致病机制奠定基础。
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