龙琥醒脑颗粒介导线粒体自噬对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑神经细胞的保护作用

作者：张占伟; 廖亮英; 杨惠; 曾劲松; 胡佳; 高宇; 喻坚柏^*

来源：中医药导报, 2022, 28(11): 23-29.

DOI：10.13862/j.cn43-1446/r.2022.11.005

• 脑缺血再灌注损伤
• 龙琥醒脑颗粒
• 线粒体动力学
• 自噬
• 大鼠

目的：探讨龙琥醒脑颗粒介导线粒体自噬对脑缺血再灌注损伤模型大鼠受损脑神经细胞的保护作用。方法：参照Rynkowski方法建立MACO模型，取25只造模成功大鼠随机分为模型组、龙琥醒脑颗粒低剂量组、龙琥醒脑颗粒中剂量组、龙琥醒脑颗粒高剂量组、金纳多组，每组5只；另取正常组和假手术组各5只，予以相应药物或生理盐水干预，连续5 d；使用相应试剂盒检测线粒体的肿胀度、超氧阴离子含量、游离Ca2+含量及Na+/K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性。取25只造模成功大鼠随机分为模型组、金纳多组、龙琥醒脑颗粒组、激动剂组、抑制剂组，每组5只。另取正常组和假手术组各5只，予以相应药物或生理盐水干预，连续5 d。采用Western blotting和Real-time PCR法检测各组大鼠线粒体自噬相关LC3、P62、Beclin-1和BNIP-3的蛋白和mRNA表达情况。结果：与正常组、假手术组比较，模型组大鼠线粒体肿胀度均明显降低(P<0.05)。与模型组比较，龙琥醒脑颗粒低、中、高剂量组和金纳多组大鼠线粒体肿胀度均明显升高(P<0.05)，且龙琥醒脑颗粒高剂量组升高最为明显(P<0.05)。与正常组、假手术组比较，模型组大鼠超氧阴离子、游离Ca2+的含量明显升高，游离Na+/K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性明显降低(P<0.05)。与模型组比较，龙琥醒脑颗粒低、中、高剂量组和金纳多组大鼠线粒体超氧阴离子、游离Ca2+的含量明显降低，游离Na+/K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性明显升高(P<0.05)。与正常组比较，模型组大鼠脑组织线粒体中LC3、Beclin-1、BNIP-3蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),P62蛋白和mRNA表达升高(P<0.05)。与模型组比较，金纳多组、龙琥醒脑颗粒组、激动剂组LC3、Beclin-1、BNIP-3蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.05),P62蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05)；抑制剂组大鼠脑组织线粒体中LC3、Beclin-1、BNIP-3蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05),P62蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论：龙琥醒脑颗粒可以减轻MACO大鼠脑线粒体肿胀程度，提高线粒体ATPase活性，降低超氧阴离子和游离Ca2+含量，治疗CIRI；其机制可能是通过促进线粒体自噬的激活，从而对脑缺血再灌注受损神经细胞损伤产生保护作用。

• 单位
  湖南中医药大学第一附属医院; 湖南中医药大学