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摘要
目的 研究大黄对脓毒症心肌损伤和线粒体功能障碍的保护作用。方法 网络药理学方法预测大黄与脓毒症心肌损伤的相关靶点，进行网络构建和蛋白质-蛋白质互作(PPI)分析，功能富集分析，构建活性成分-靶点-通路-疾病复方网络图。构建脂多糖(LPS)诱导的心肌损伤细胞模型，并将其分为正常对照组、LPS处理组和LPS+大黄组(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L)三组。CCK-8试剂盒检测细胞增殖，流式细胞术分析细胞凋亡，MitoSOX线粒体超氧化物红色荧光探针测定线粒体活性氧(ROS)含量，线粒体膜电位荧光探针JC-10检测线粒体膜电位水平，荧光探针Calcein AM检测线粒体通透性转换孔开放程度，透射电镜分析线粒体超微结构，蛋白质印迹(Western Blot)法测定相关蛋白表达水平。结果 (1)网络药理学结果表明，共有21个靶点与大黄治疗脓毒症心肌损伤相关。PPI构建网络显示，细胞肿瘤抗原p53(TP53)、胱天蛋白酶3(CASP3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、髓细胞增生原癌基因(MYC)、肿瘤坏死因子(TNF)、凋亡蛋白(BAX)和抗凋亡蛋白(Bcl-2)是关键靶点。基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析表明，磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路在大黄调控脓毒症心肌损伤过程中起重要作用。(2)与对照组比较，LPS处理组细胞增殖能力下降且心肌细胞凋亡增加，线粒体ROS含量增加，线粒体膜电位降低，线粒体通透性转换孔开放，线粒体超微结构破坏。大黄可逆转LPS对心肌细胞的上述损伤效应。(3)在LPS诱导的脓毒症心肌损伤细胞模型中，磷酸化磷酯酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、CASP3和BAX的蛋白表达水平增加，而Bcl-2的蛋白表达水平降低。大黄可逆转上述表达，以10μmol/L效果最显著。结论 大黄通过PI3K/AKT通路调控心肌细胞线粒体氧化应激，减少细胞凋亡，降低脓毒症引起的心肌损伤。
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