白玉菇酸性磷酸酯酶的分离纯化及酶学性质研究

作者：张蕾; 张航

来源：安徽农业科学, 2021, 49(10): 4-7.

• 白玉菇
• 酸性磷酸酯酶
• 分离纯化
• 动力学特性
• 酶活性

[目的]对白玉菇酸性磷酸酯酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。[方法]以白玉菇为材料提取酸性磷酸酯酶(ACPase, EC.3.1.3.2),进一步将原酶液盐析、层析2种常用的蛋白纯化技术,分离得到酸性磷酸酯酶,并对该酶的酶学性质进行研究。[结果]该酶分子量约为70 kD,水解对硝基苯磷酸二钠(pNPP)最适pH为4.5,等电点为5.5,最适温度为40℃,该酶在50℃时有热激活效应;紫外吸收光谱测定结果表明,酶有2个吸收峰,分别在220和280 nm处;耐热时间表明在40℃下耐热保温40 min后,酶活力为最大活力的60.79%,并在保温20 min时酶活力最大,50℃时酶活力随着保温时间的延长而降低,保温20 min后,酶活力下降为最初酶活力的20.77%;Hg2+、Pb2+、Ag+、Cd2+ 4种金属离子对酶活性均有抑制作用,Ag+抑制作用最强。酶的动力学参数Km为0.031 mmol/L、Vmax为0.204 mmol/(L·min)、酶反应初速度为18.66×10-3μmol/L。[结论]酸性磷酸酯酶的活性受温度、pH、金属离子等外界条件的影响,因此在栽培过程中需要控制环境温度及培养基酸碱度等条件。