利用GFP-Trap技术筛选与TaTLP1相互作用的蛋白

作者：王菲; 杨毅清; 武文月; 崔钟池; 王海燕^*; 刘大群

来源：河北农业大学学报, 2020, 43(02): 76-82.

DOI：10.13320/j.cnki.jauh.2020.0033

• 小麦叶锈病
• Gateway克隆
• GFP-Trap
• 蛋白互作

小麦类甜蛋白基因TaTLP1,在植物抗病防御反应中起重要作用。为筛选与TaTLP1相互作用的蛋白,本研究拟通过Gateway定向克隆技术构建带有GFP标签的重组载体TaTLP1-pEarleyGate103,在烟草中完成异源表达。利用GFP-Trap技术获得与TaTLP1互作的蛋白,质谱分析明确其种类。通过Western blot检测TaTLP1表达情况,以GFP抗体检测,膜上曝光结果显示,在约44 kD处出现条带,证明TaTLP1蛋白在烟草中成功表达;质谱分析GFP-Trap获得的洗脱蛋白,表明获得的候选互作蛋白中定位于胞外的病程相关蛋白1(Pathogenesisrelated protein 1, PR1)、非特异性脂质转移蛋白(Non-specific lipid-transfer protein, nsLTPs)等可能与TaTLP1存在互作。该试验为探索TaTLP1参与小麦抗叶锈病基因Lr19的防御反应机制奠定了理论基础。

• 单位
  中国农业科学院研究生院; 河北农业大学