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摘要
目的 采用网络药理学方法分析顾步汤治疗糖尿病足溃疡（DFU）的可能作用靶点及相关机制，并进行细胞实验验证。方法 利用TCMSP数据库查找顾步汤主要有效成分及作用靶点，通过GeneCards、OMIM数据库收集与DFU相关基因，建立疾病-靶点-化学成分网络。通过GO和KEGG通路富集分析探讨顾步汤对DFU可能的作用途径。构建NIH/3T3细胞和RAW264.7细胞共培养体系，将细胞随机分为空白组、模型组、抑制剂组及顾步汤低、中、高剂量组，除空白组外，其余各组均以脂多糖诱导RAW264.7细胞构建巨噬细胞模型，采用白细胞介素-4(20 ng/mL)诱导建立巨噬细胞M2极化模型。采用流式细胞术检测NIH/3T3细胞凋亡率及M2型巨噬细胞数量，CCK-8法检测NIH/3T3细胞增殖率，划痕实验检测NIH/3T3细胞迁移率，Western blot检测Arg-1、FIZZ1及Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达，RT-PCR检测Arg-1、FIZZ1、Wnt4a、β-Catenin mRNA表达，免疫荧光染色检测Wnt4a和β-Catenin蛋白表达。结果 通过数据库检索获得顾步汤有效成分121个，主要成分对DFU的作用靶点共50个。KEGG通路富集分析得到顾步汤与DFU显著共关联的信号通路包括Wnt、PI3K-AKT、HIF-1信号通路等。细胞实验显示，顾步汤可显著降低NIH/3T3细胞凋亡率及M2型巨噬细胞数量，增加NIH/3T3细胞增殖率及迁移率，下调Arg-1、FIZZ1、Wnt4a、β-Catenin蛋白及mRNA表达，降低Wnt4a、β-Catenin免疫荧光强度。结论 顾步汤能够刺激巨噬细胞M2极化，调控Wnt/β-Catenin信号通路，从而发挥治疗DFU作用。
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单位河南中医药大学; 黑龙江省中医药科学院
