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摘要
背景：牛磺熊去氧胆酸是一种亲水性胆汁酸衍生物，在多种神经系统疾病模型中均有神经保护作用，但目前鲜有报道研究牛磺熊去氧胆酸对脊髓损伤的作用。目的：观察缺糖缺氧条件下牛磺熊去氧胆酸对脊髓神经元凋亡的作用，以及对脊髓损伤后小鼠运动功能恢复的影响。方法：（1）体外实验：从孕13.5 d的C57 BL/6小鼠胚胎中分离提取原代脊髓神经元，培养72 h后，分3组处理：正常组加入Neurobasal完全培养基，置于CO2培养箱（体积分数5%CO2+95%空气）内培养24h；氧糖剥夺组加入无糖的Neurobasal培养基，置于三气培养箱（体积分数94%N2+5%CO2+1%O2）培养12 h，更换为Neurobasal完全培养基后置于CO2培养箱内培养12 h；实验组处理过程大致同氧糖剥夺组，其中在加入无糖Neurobasal培养基的同时加入牛磺熊去氧胆酸。采用TUNEL染色检测细胞凋亡，CCK-8法检测细胞活性，免疫荧光染色检测细胞βⅢ微管蛋白表达。（2）动物实验：采用随机数字表法将60只C57 BL/6小鼠分为假手术组、脊髓损伤组与实验组，每组20只，脊髓损伤组与实验组采用Allen打击法建立T9-T10脊髓损伤模型，造模后第1天开始，实验组灌胃给予牛磺熊去氧胆酸溶液，假手术组与脊髓损伤组灌胃给予生理盐水，1次/d。连续给药14 d后，采用行为学和组织学方法评估脊髓组织修复情况。结果与结论：（1）体外实验：TUNEL染色、CCK-8与免疫荧光染色检测显示，氧糖剥夺组细胞凋亡数量高于正常组（P <0.01），细胞活性与βⅢ微管蛋白表达低于正常组（P <0.01）；实验组细胞凋亡数量低于氧糖剥夺组（P <0.01），细胞活性与βⅢ微管蛋白表达高于氧糖剥夺组（P <0.01）。（2）动物实验：旷场实验BBB评分与后肢足迹实验显示，实验组小鼠行走与运动功能恢复程度好于脊髓损伤组。苏木精-伊红染色显示，脊髓损伤组小鼠脊髓损伤部位可见明显畸形和空洞，神经细胞数量明显减少；与脊髓损伤组比较，实验组脊髓损伤病变面积显著减小，脊髓畸形程度更小、空洞更少，神经细胞数量增加。免疫荧光染色显示，脊髓损伤组神经元胞核标记神经元细胞数量少于假手术组（P <0.01），实验组神经元胞核标记神经元细胞数量高于脊髓损伤组（P <0.01）。（3）结果表明：牛磺熊去氧胆酸能减少缺糖缺氧引起的脊髓神经元凋亡、轴突的丢失，促进脊髓损伤小鼠运动功能的恢复。
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