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摘要
为了建立高效的A型塞内卡病毒（SVA）的血清学检测方法，本研究经PCR扩增SVA VP2-1基因后构建重组质粒pET-32a-VP2-1，将其转化大肠杆菌感受态诱导表达重组rVP2蛋白，表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用Western blot鉴定，结果显示，重组rVP2蛋白可以与SVA阳性血清特异性反应。以重组rVP2蛋白为包被抗原，经反应条件的优化，建立了基于SVA VP2抗原区的间接ELISA抗体检测方法。本研究建立的间接ELISA检测方法的最适抗原包被浓度为2μg/mL，待检血清的最适稀释度为1.500，兔抗猪HRP-IgG稀释度为1.10 000，使用5%脱脂牛奶的PBST作为封闭液37℃孵育1 h，最佳显色时间为10 min。当检测样品的S/P值<0.201时，样品结果为阴性；当检测样品的S/P值≥0.201时，结果为阳性。利用该方法检测SVA，猪伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）、口蹄疫病毒（FMD）、猪瘟病毒（CSFV）阳性血清，结果显示，除SVA检测阳性外，其他均为阴性，特异性较强。将SVA阳性血清稀释（1.50,1.100,1.200,1.400,1.800,1.1 600）后经该间接ELISA方法检测，评估其敏感性，结果显示，SVA的阳性小鼠血清在1.800稀释后检测结果仍为阳性，敏感性较高。批内、批间重复试验结果显示，变异系数均小于10%，该方法重复性好。利用本实验建立的间接ELISA方法与血清中和试验同时对266份临床血清样品检测，结果显示，两种方法检测结果符合率为97.7%。本研究首次基于重组rVP2蛋白建立的间接ELISA方法操作简单，特异性强，敏感性高，重复性好的血清学诊断方法，为SVA的检测和预防提供了可靠的技术支持。
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