慢病毒介导的过表达miR181a基因修饰的骨髓间充质干细胞系的建立

作者：吕玮琦; 胡瑞雪; 张思凡; 李呼伦; 刘玉梅; 穆莉莉; 孙博; 孔庆飞; 王广友; 刘希君^*

来源：国际免疫学杂志, 2021, 44(03): 239-244.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2021.03.001

• 慢病毒载体
• miR181a
• 骨髓间充质干细胞

目的构建携带过表达miR181a的慢病毒载体, 转染骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSC), 使基因修饰后的BMSC持续高水平表达miR181a。方法将miR181a质粒与三种助转质粒PRSV, PRRE, VSVG共同转染进293T细胞中, 构建含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)的过表达miR181a的慢病毒表达载体。72 h后收获过表达miR181a的病毒液, 转染BMSC。用嘌呤霉素筛选, 得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC, 即miR181a-BMSC。结果成功构建出携带miR181a的慢病毒载体, 转染率超过95%。嘌呤霉素筛选BMSC, 得到能够长期稳定过表达miR181a的BMSC, 与BMSC组相比, miR181a-BMSC组中, miR181a的表达量明显增多, 差异具有统计学意义(3.80比25.92, t=19.401, P<0.05)。提取BMSC和miR181a-BMSC的外泌体, 纯化后miR181a-BMSC的外泌体内miR181a表达量明显增高, 差异具有统计学意义(1.41比0.87, t=6.003, P<0.05)。结论成功构建出慢病毒介导的过表达miR181a基因修饰的骨髓间充质干细胞。

• 单位
  哈尔滨医科大学