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摘要
目的观察实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)模型大鼠CD4+T细胞中miR-142- 5p及叉头转录蛋白O亚族3(FOXO3)的表达, 初步探讨两者靶向关系以及对EAU的影响。方法健康雄性Lewis大鼠10只随机分为模型组、对照组。模型组大鼠以过继免疫方式诱导EAU动物模型。免疫后20 d, 取对照组、模型组大鼠眼球和引流淋巴结提取CD4+T细胞, 并分为对照组、模型组、mimic-阴性对照(NC)组、miR-142-5p-mimic组、小干扰(si)-NC组、si-FOXO3组进行体外实验。miR-142-5p-mimic组、si-FOXO3组分别转染miR- 142-5p-mimic、si-FOXO3。健康雄性Lewis大鼠25只随机分为模型组、转染mimic-NC组、转染miR-142-5p-mimic组、转染si-NC组、转染si-FOXO3组, 分别注射上述体外实验组细胞。免疫后4、8、12、16、20 d行裂隙灯显微镜检查并进行EAU评分;免疫后20 d, 苏木精-伊红染色行组织病理学分级。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠CD4+T细胞和眼组织中miR-142-5p、FOXO3 mRNA相对表达量及细胞培养上清液中辅助性T细胞17(Th17)标志物白细胞介素(IL)-17、IL-22、维甲酸相关孤儿受体γ(RORγ)mRNA相对表达量。生物信息学网站及双荧光素酶预测miR-142-5p与FOXO3的靶向关系。组间比较采用单因素方差分析或t检验。结果模型组大鼠均出现不同程度EAU症状, 随时间延长, 其症状加重。与对照组比较, 模型组大鼠CD4+T细胞中miR-142-5p mRNA相对表达量升高, FOXO3 mRNA相对表达量下降, 差异均有统计学意义(t=7.374、10.423, P=0.002、0.001)。与mimic-NC组比较, miR-142-5p-mimic组大鼠CD4+T细胞中miR-142-5p mRNA相对表达量上升, 差异有统计学意义(t=6.540, P=0.003 )。与模型组、mimic-NC组、si-NC组比较, miR-142- 5p-mimic组、si-FOXO3组大鼠CD4+T细胞培养上清液中IL-17、IL-22、RORγ mRNA相对表达量均显著增加, 差异有统计学意义(F=26.110、6.292、5.269、55.660、10.490、11.430, P<0.05)。与转染mimic-NC组比较, 转染miR-142-5p-mimic组大鼠眼组织中miR-142-5p mRNA相对表达量显著上升, 差异有统计学意义(t=6.690, P<0.05 );与转染si-NC组比较, 转染si-FOXO3组大鼠眼组织中FOXO3 mRNA相对表达量显著下降, 差异有统计学意义(t=17.751, P<0.05)。转染mimic-NC组、转染miR-142-5p-mimic组、转染si-NC组、转染si-FOXO3组大鼠免疫后随时间延长, EAU评分均呈上升趋势。转染miR-142-5p-mimic组大鼠EAU评分与组织病理学分级均较转染mimic-NC组升高, 差异有统计学意义(t=5.633、6.286, P<0.05)。转染si- FOXO3组大鼠EAU评分与组织病理学分级均较转染si-NC组升高, 差异有统计学意义(t=6.852、6.635, P<0.05)。FOXO3与miR-142-5p具有靶向关系。结论 EAU大鼠CD4+T细胞中, miR-142- 5p表达上调, FOXO3表达下调;miR-142-5p靶向调控FOXO3表达促进Th17细胞相关炎性因子发展。
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单位郑州大学第一附属医院; 商丘市第一人民医院
