应用CRISPR/Cas9体系对番茄PSY 1基因的定点编辑

作者：成妍; 焦彦生; 乔宁; 苗如意

来源：中国蔬菜, 2018, (11): 32-38.

DOI：10.19928/j.cnki.1000-6346.2018.11.007

• CRISPR-Cas9
• PSY 1基因
• 番茄
• 基因敲除

基于NCBI数据库提供的番茄八氢番茄红素合成酶基因(PSY 1)全长,并根据基因序列中PAM(proto adjacent motif)的位置设计特异性sg RNA,构建CRISPR/Cas9 Level 1、Level 2载体;将设计好的载体转化农杆菌,继而转染番茄子叶,利用PCR产物测序法检测sg RNA在番茄基因组中的敲除效率。结果表明,36个转基因植株中有22个PSY 1基因目标区出现不同数目的碱基缺失、增加或互换,初步估计基因敲除效率为61%。本试验在番茄中初步建立了CRISPR/Cas9介导的基因敲除技术,该技术能够稳定的在番茄中实现基因敲除。

• 单位
  山西省农业科学院蔬菜研究所