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摘要
目的开发能够用于检测HPV16、HPV18感染的诊断技术,原核表达HPV16E6、18E6重组蛋白,制备相应的单克隆抗体,为建立HPV的诊断方法提供物质基础。方法BL21-PET28a-16E6、BL21-PET28a-18E6工程菌株由该实验室前期构建,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导HPV16E6、18E6重组蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)、蛋白质免疫印迹法(Western blot)对HPV16E6、18E6重组蛋白进行鉴定,His亲和层析柱对目的蛋白进行纯化。以纯化的重组蛋白HPV16E6、18E6为免疫原免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备相应单克隆抗体,间接法测抗体,酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性。结果表达并纯化获得了HPV16E6、18E6蛋白,杂交瘤技术获得HPV16E6-2-G9、HPV16E6-2-F2、HPV18E6-3-H1杂交瘤细胞株,Western bolt结果显示,其分泌抗体可分别与HPV16E6、18E6特异性结合,用HPV16E6-2-G9、HPV18E6-3-H1制备的腹腔积液效价分别可达106。结论成功制备抗HPV16E6、18E6单克隆抗体,该抗体效价高,特异度好,为建立血清学诊断方法打下了基础。
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