KDR为靶的反义寡核苷酸、siRNA活性比较

作者：郑素军; 林汝仙; 夏云; 黄爱龙; 钟森; 王升启; 任红

来源：重庆医科大学学报, 2005, 30(3): 340-344,382.

DOI：10.3969/j.issn.0253-3626.2005.03.006

• 反义寡核苷酸
• siRNA
• 血管内皮生长因子受体2

目的:观察反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,asONs),细胞内源性表达的短发卡状小干扰RNA(short hairpinsmall interfering RNA,siRNA)对血管内皮生长因子受体2(VEGFR2/KDR:Vascular endothelial growth factor receptor 2/kinaseinsert domain-containing receptor)表达的抑制作用,探讨阻断DKR蛋白表达对MCF-7细胞增殖、生长的影响,并对两者作了比较.方法:设计了3条反义寡核苷酸,并根据其相应靶KDR mRNA杂交位点,构建了3条以质粒pPUR/U6为载体的可内源性表达短发卡状siRNA的pPUR/U6/KDR-siRNA.分别用Western-blotting方法检测了MCF-7细胞经反义寡核苷酸处理,pPUR/U6/KDR-siRNA稳定转染后对KDR蛋白表达的抑制作用;用MTT法观察了反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖的影响,并观察了pPUR/U6/KDR-siRNA稳定转染细胞的生长曲线.结果:3条反义寡核苷酸于0.8μmol/L时,均有效抑制了细胞KDR蛋白表达,抑制率分别为66.16%,50.21%,58.35%;3条反义寡核苷酸对MCF-7细胞增殖也显示了剂量依赖性下调作用.相应靶位点3条pPUR/U6/KDR-siRNA中,有2条在细胞稳定转染时显著下调了KDR蛋白表达,15天抑制率分别为75.21%,80.08%;30天时为59.29%,60.15%;细胞稳定转染表达siRNA后生长变慢.结论:可根据有效反义寡核苷酸靶位点设计siRNA,稳定转染内源性表达的短发卡状siRNA可长期抑制靶基因表达,并起了更为高效的抑制作用.

• 单位
  重庆医科大学; 军事医学科学院; 放射医学研究所