猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03株VP1蛋白的原核表达及其反应原性

作者：申识川; 时洪艳; 陈建飞; 孙东波; 吕茂杰; 王承宝; 范秀萍; 陈小金; 冯力

来源：中国兽医科学, 2009, (10): 847-851.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2009.10.002

• 猪捷申病毒
• VP1基因
• 克隆
• 原核表达
• 纯化
• 免疫印迹 porcine teschovirus
• VP1 gene
• cloning
• prokaryotic expression
• purification
• Western-blot

根据猪捷申病毒(PTV)Swine/CH/IMH/03株的基因组序列(GenBank登录号:DQ355222)设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出了PTV的VP1基因片段,将其克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET-VP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子质量为45 ku的融合蛋白,在1.0 mmol/L IPTG诱导6 h后,重组菌的表达效果最好,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的63.4%,表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。表达产物经Ni柱纯化后,薄层扫描显示,目的蛋白的纯度达到了97%。W...

• 单位
  生命科学学院; 东北农业大学; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室