基因串联原核高效表达胸腺肽α1

作者：金明飞; 徐伟东; 黄静; 金丽; 王嘉; 叶海峰; 吴自荣

来源：中国生物工程杂志, 2007, 27(1): 11-15.

DOI：10.3969/j.issn.1671-8135.2007.01.003

• SD序列-基因串联
• 高效表达
• 小肽
• 胸腺肽α1

人工合成含有SD序列、胸腺肽α1(Tα1)基因、纯化标签和酶切位点的DNA序列作为构建元件,利用同尾酶将其依次克隆到pET-32a(+)中,得到含有1～8个不同重复数目的含SD序列基因的串联表达载体,利用PCR初步鉴定和进一步的测序证实序列完全正确.进而利用lacZ基因作为指示基因,将带有SD序列的lacZ基因克隆到不同Tα1基因串数载体末尾,利用蓝白斑实验验证启动子后不同SD序列的效率,证实串联载体中的各个SD序列均能有效启动翻译.在此基础上对各串表达载体进行摇瓶发酵,SDS-PAGE电泳检测证实各串均可正确表达Tα1,且为可溶性表达,为小肽原核高效表达提出了新方法,有望成为小肽高效表达的新途径.

• 单位
  生命科学学院; 上海市药品检验所; 华东师范大学