扶正化瘀复方抑制小鼠自噬的抗纤维化机制研究

作者：黄兰蔚; 姜娜; 平键; 张晶; 徐列明^*

来源：中华肝脏病杂志, 2019, 27(08).

• 肝纤维化
• 肝星状细胞
• 自噬
• 扶正化瘀复方
• 丹参酚酸B

目的明确扶正化瘀复方抗肝纤维化的作用是否与其抑制自噬有关。方法 C57小鼠随机分为正常组(N组)和造模组, 造模组采用四氯化碳腹腔注射诱导小鼠肝纤维化模型, 正常组注射等剂量橄榄油, 1周后将造模组随机分为模型(M)组、雷帕霉素(Rapa)组、雷帕霉素加氯喹(Rapa+CQ)组、雷帕霉素加丹参酚酸B(Rapa+Sal B)组、雷帕霉素加扶正化瘀方(Rapa+FZ)组, 各药物组每日相应药物灌胃, N组、M组等剂量饮用水灌胃。5周后处死小鼠, HE和天狼猩红染色分别观察各组肝组织炎症和胶原沉积情况, 碱水解法测定羟脯氨酸含量。蛋白质印迹法检测肝组织中自噬的表达变化和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3II/I)、p62、α-平滑肌肌动蛋白(ɑ-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白表达, 冰冻切片免疫荧光染色观察各组肝组织ɑ-SMA及LC3B免疫荧光定位。两独立样本间的比较用t检验, 多个样本均数比较采用LSD检验或Dunnett T3检验。结果 N组与M组小鼠体质量差异无统计学意义, 各药物组小鼠体质量均明显下降(F = 14.041, P < 0.001)。M组和各药物组小鼠的肝质量/体质量比和脾质量/体质量比较N组均有明显增加(F值分别为26.992、6.589, P值均< 0.001)。与M组比较, 各用药组小鼠肝组织p62蛋白表达降低, 其中Rapa组和Rapa+Sal B组差异有统计学意义(F = 3.085, P值分别为0.039、0.003), Rapa+Sal B组则更低;与M组比较, Rapa组LC3BⅡ的表达显著升高(F = 7.514, P = 0.01)。免疫荧光染色显示N组小鼠肝脏内未见LC3B与α-SMA共染细胞, M组小鼠肝内见到共染细胞, 各药物组小鼠肝内共染细胞明显多于M组, 其中Rapa+FZ组的共染细胞较少。与N组相比, M组和各药物组胶原显著增加, 各药物组胶原沉积较M组减少, 各药物组间差异无统计学意义。与N组(值为77.75±48.79)相比, M组小鼠的肝组织羟脯氨酸明显升高(值为293.48±84.43)(F = 3.015, P = 0.005),各药物组小鼠肝组织羟脯氨酸含量均较M组减少, 但差异无统计学意义(F = 0.750, P = 0.573)。与N组相比, M组α-SMA和I型胶原蛋白的表达均明显增加(F值分别为27.718、18.893, P值均< 0.01)。Rapa组和Rapa+Sal B组的α-SMA的表达与M组相似;而Rapa+CQ组和Rapa+FZ组较Rapa组和M组有显著降低(P值均< 0.01)。Rapa+CQ组的I型胶原蛋白表达明显高于Rapa组(P = 0.017), 而Rapa+FZ组的I型胶原蛋白表达则明显低于M组(P = 0.013)。结论四氯化碳诱导的肝纤维化模型中, 观察到肝星状细胞的自噬;雷帕霉素能促进肝细胞和肝星状细胞的自噬;扶正化瘀方和丹参酚酸B均能对抗雷帕霉素促自噬的作用。

• 单位
  上海中医药大学; 国家中医药管理局; 上海中医药大学附属曙光医院