利用Tet-On系统敲低PRDM5对BEAS-2B细胞增殖的影响

作者：王野; 房丽娇; 任媛媛; 刘欣^*

来源：生物技术, 2018, 28(06): 543-536.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.06.0094

• Tet-On系统
• PRDM5
• BEAS-2B
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

[目的]探讨利用dox诱导的Tet-On调控系统敲低PRDM5基因对人正常支气管上皮细胞BEAS-2B增殖的影响。[方法]构建敲低PRDM5基因的p LKO-Tet-On-PRDM5-shRNA慢病毒质粒,包装生产慢病毒并转染BEAS-2B细胞,以相同条件制备转染p LKO-Tet-On-control-shRNA的BEAS-2B细胞作为对照。Western Blot法检测PRDM5蛋白的表达水平; MTT实验观察细胞增殖情况;平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡水平。[结果]在合适剂量的dox诱导下(0. 5μg/mL),敲低组细胞中PRDM5蛋白表达明显低于对照组(P <0. 05);各时间点OD值高于对照组(P <0. 05);克隆形成数大于对照组(P <0. 01);凋亡率低于对照组(P <0. 01)。[结论]成功构建出Tet-On系统调控敲低PRDM5的BEAS-2B细胞系。PRDM5基因敲低可促进BEAS-2B细胞增殖并且抑制其凋亡。

• 单位
  基础医学院; 天津医科大学