白花丹参谷氧还蛋白SmGRX2基因的克隆及其对丹参的转化

作者：赵法兴; 李艳玲; 郝岗平^*

来源：时珍国医国药, 2022, 33(03): 725-729.

• 白花丹参
• SmGRX2基因克隆
• 表达分析
• 表达载体构建
• 遗传转化

目的 获取白花丹参GRX基因的全长cDNA序列(命名为SmGRX2),并分析其序列特征和不同外源胁迫下的表达特征，构建其表达载体并转化到白花丹参。方法 利用已有白花丹参cDNA全长文库，随机测序获得SmGRX2全长序列。BLAST进行序列比对，Motif Scan软件分析氨基酸序列的功能区段，real-time RT-PCR技术分析基因表达特征；将SmGRX2连接到含有双增强子的高效植物双元表达载体pGreen0029-GFP上，获得含融合DHA基因的植物双元表达载体pGreen0029-SmGRX2-DHA,采用电击法将含SmGRX2的植物表达载体转入根癌农杆菌LBA4404中，用叶片浸染法转化白花丹参。结果 获得ORF为372bp的SmGRX2全长cDNA序列，编码氨基酸123个，氨基酸序列分析发现其具有典型的GRX prosite patters CCMC, NCBI登录号为KJ009322。Real-timePCR分析其在根部中表达量最高。SA和MeJA处理均能较强的诱导该基因的表达。对再生植株用PCR检测证实了SmGRX2基因的导入，pGreen0029-SmGRX2-DHA的转化率为24.4%。结论 首次获得白花丹参SmGRX2全长基因序列，分析其可能参与对抗病等生物胁迫的响应；成功获得过表达SmGRX2转基因植株，为SmGRX2基因的进一步功能分析奠定了基础。

• 单位
  生命科学学院; 江西中医药高等专科学校; 山东第一医科大学