人类REL M-beta基因启动子的结构与功能分析

作者：郑丽端; 童强松; 杨渝珍; 侯晓华; 杨秀萍; 董继华

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2007, (07): 548-553.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2007.07.007

• 抵抗素样分子家族(RELMβ)基因
• 启动子
• 报告基因

为克隆人类抵抗素样分子β(resistin-like molecule beta,RELMβ)基因的上游启动子序列,并观察其不同截短片段的启动子活性,以人类基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-871～+50bp、-729～+50bp、-471～+50bp、-438～+50bp、-371～+50bp大小的RELMβ启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因载体,并制备转录因子CDX-2结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染人胚肾293细胞、结肠癌HCT116和SW480细胞、宫颈癌HeLa细胞.结果发现,各RELMβ启动子片段在293、HCT116、SW480细胞中均有活性,但在HeLa细胞中活性缺失;-471～-438bp区存在RELMβ启动子的核心调控元件.针对该区域CDX-2转录因子结合位点进行突变,能导致RELMβ启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合CDX-2.结果提示,成功克隆了具有活性的RELMβ启动子序列,CDX-2为其重要的转录因子,为研究RELMβ基因的转录调控机制奠定了实验基础.

• 单位
  中心实验室; 华中科技大学同济医学院附属协和医院