含TK-IES-ES非融合基因重组腺相关病毒的构建及其功能的初步鉴定

作者：潘建刚; 周兴; 韩瑞发; 陈志光; 李江婷

来源：基础医学与临床, 2009, (08): 863-866.

• 膀胱肿瘤
• 腺相关病毒
• 自杀基因
• 内皮抑素 bladder cancer
• adeno-associated virus
• suicide gene
• endostatin

目的探讨重组腺相关病毒(rAAV)-胸苷激酶(TK)-核糖体插入位点(IRES)-内皮抑素(ES)(简称rAAVTIE)非融合载体的构建及每个目的基因相应生物学效应的初步鉴定。方法(1)用PCR分别扩增IRES、TK、ES序列至pMD-19T simple载体,构建pAAV-TK-IRES-ES;(2)分别采用AAV-Helper Free System包装系统、"氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩。(3)用T24细胞及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对rAAV-TIE生物学效应进行初步鉴定。结果(1)成功构建pAAV-TIE非融合载体,并经酶切、PCR及测序证实;(2)rAAV病毒颗粒滴度达2×1010v.p/mL,浓缩后可达到2×1011-12v.p/mL;(3)rAAV-TIE可以分泌内皮抑素,诱导T24细胞及HUVEC凋亡。结论成功构建rAAV-TIE腺相关病毒,体外实验表明每个基因片段均能发挥相应的生物学功能。

• 单位
  天津市泌尿外科研究所; 天津医科大学第二医院; 广州医科大学