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摘要
目的 从卵巢颗粒细胞凋亡与自噬相互作用的角度，探讨活血消异方对子宫内膜异位症大鼠卵泡发育的影响及作用机制。方法 将动情周期正常的48只SD大鼠分为空白组、假手术组各10只，剩余的分为供体组(n=5)和受体组(n=23)用于造模，造模成功后的20只大鼠又分为模型组、活血消异方组各10只。活血消异方组予活血消异方汤剂2 ml灌胃，空白组、假手术组、模型组均予蒸馏水2 ml灌胃，各组连续灌胃15 d后，检测大鼠血清活性氧(ROS)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平。取各组大鼠的卵巢组织行HE染色，光镜下观察各级卵泡形态并计数；免疫组化染色定位颗粒细胞，并比较凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达；TUNEL染色观察颗粒细胞凋亡情况并计算凋亡率；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织中凋亡及自噬相关蛋白p-JNK、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Beclin-1、LC3Ⅱ的表达；电镜观察各组大鼠卵巢颗粒细胞自噬体形态，并计算自噬体胞质面积比。结果 (1)与空白组、假手术组比较，模型组血清ROS含量显著升高，T-SOD、CAT水平显著降低(P<0.05);与模型组比较，活血消异方组血清ROS含量显著降低，T-SOD、CAT水平显著升高(P<0.05)。(2)与空白组、假手术组比较，模型组次级卵泡数目显著下降(P<0.05),卵巢颗粒细胞凋亡率显著升高(P<0.001);与模型组比较，活血消异方组次级卵泡数目显著升高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.001)。(3)与空白组、假手术组比较，模型组卵巢颗粒细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.001);与模型组比较，活血消异方组卵巢颗粒细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.001)。(4)与空白组、假手术组比较，模型组卵巢组织中p-JNK、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较，活血消异方组卵巢组织中p-JNK、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。(5)电镜下观察卵巢颗粒细胞中自噬体结果显示，4组间自噬体胞质面积比的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 活血消异方可能通过ROS-JNK信号通路，改善子宫内膜异位症大鼠氧化应激状态，减少卵巢颗粒细胞凋亡，启动颗粒细胞保护性自噬，改善子宫内膜异位症大鼠卵泡发育。
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单位中国中医科学院广安门医院; 首都医科大学; 医药学院; 首都医科大学附属北京妇产医院
