稳定过表达XAF1基因鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株的构建

作者：武江波; 苏芳; 李龄; 朱小东; 陈龙; 曲颂; 莫柒艳; 林欢

来源：中国癌症防治杂志, 2016, 8(06): 349-353.

• 鼻咽肿瘤
• X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1
• 慢病毒载体
• 鼻咽癌放射抗拒细胞
• 基因转染
• 荧光效率

目的构建稳定过表达X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitor of apoptosis associated factor 1,XAF1)基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。方法分别将携带XAF1基因感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50的慢病毒稀释液、MOI为100的慢病毒原液和MOI为100的慢病毒原液加入终浓度为5μg/m L的聚凝胺(polybrene)转染人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光数量及强度评判转染效率,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reversetranscription polymerase chain reaction,q RT-PCR)和蛋白免疫印记法(western blot)检测XAF1基因m RNA和蛋白的表达。结果慢病毒稀释液转染,约60%的细胞可观察到微弱荧光;慢病毒原液转染,约70%的细胞观察到较弱荧光;慢病毒原液加入5μg/m L polybrene的转染效率较高,约90%的细胞观察到较强荧光。嘌呤霉素筛选上述转染效率最高的慢病毒原液加5μg/m L polybrene组细胞,其成功将携带XAF1基因的慢病毒转入鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。q RT-PCR和western blot进一步证实细胞株稳定过表达XAF1基因。结论慢病毒加polybrene转染可成功构建稳定过表达XAF1基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。

• 单位
  广西医科大学附属肿瘤医院; 广西医科大学