等电聚焦分离与~(18)O稳定同位素标记联用的磷酸化蛋白质组学定量方法研究

作者：隋少卉; 王京兰; 贾伟; 卢庄; 刘金风; 宋丽娜; 蔡耘; 钱小红

来源：分析化学, 2008, (08): 1017-1023.

• 18O标记技术
• 等电聚焦
• 傅里叶交换离子回旋质谱(LTQ-FTICR-MS)
• 磷酸化蛋白质组定性与定量 18O Labeling method
• isoelectric focusing
• linear ion trap Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry
• qualitative and quantitative phosphoproteomics

磷酸化蛋白质组学定量分析,要对磷酸化修饰富集技术和定量技术进行研究。基于此,本研究采用18O稳定同位素标记技术对胰蛋白酶酶解肽段混合物进行标记,并对其标记时间和标记后胰蛋白酶的变性条件进行优化。结果表明:在pH=4～5的KH2PO4缓冲体系中,37℃,标记反应持续19～24h,除了C-端肽之外,几乎所有的肽段都可达到100%标记;采用TCEP可以有效地抑制16O-18O回标现象。建立了与18O标记技术兼容性良好的IPG-IEF技术对磷酸化肽段进行选择性富集,富集后共从HepG2细胞中鉴定到491个磷酸化位点、362个磷酸化肽段和356个磷酸化蛋白,表明IPG-IEF在大规模磷酸化肽段分离富集中...

• 单位
  军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 蛋白质组学国家重点实验室; 北京蛋白质组研究中心