传染性造血器官坏死病毒重组酶介导等温扩增快速检测方法的建立和验证

作者：朱崧琪; 吴江; 廖立珊; 朱裕敏; 王津津; 朱鹏; 温智清; 贾鹏; 杨鲤源; 刘荭

来源：中国兽医科学, 2023, 53(07): 805-810.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0137

• 传染性造血器官坏死病病毒
• 重组酶介导扩增
• 快速检测

为建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒（IHNV）的荧光重组酶介导扩增（RAA）方法，本试验参考世界动物卫生组织（WOAH）《水生动物法典（第6版）》所列的诊断方法确认原则，根据IHNV核酸保守序列设计特异性引物和探针，选用其G蛋白保守序列中长度为196 bp的片段构建重组质粒，在不同反应条件下进行优化，建立RT-RAA检测技术，并通过26个IHNV不同基因型毒株和本实验室保存样品进行验证。结果显示，该方法对5个基因型IHNV的26种毒株均敏感，与另外7种RNA病毒无交叉反应，且反应时间仅为RT-PCR的1/5；对重组质粒原液做4个梯度稀释后，在10-4稀释度时完全呈阴性；通过对71份临床样品的验证，阳性检出率为80.28%。上述结果表明，本研究建立的RT-RAA方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好、检测时间短、不完全依赖实验室设备和条件等优势，可为IHN防控提供更便捷、更适合现场检测的工具。

• 单位
  深圳技术大学; 深圳海关动植物检验检疫技术中心