小干扰RNA沉默MDR1基因对SMMC-7721肝癌细胞株多药耐药性的影响

作者：汪洋; 褚忠华; 刘建平; 张大伟; 韦金星; 陕基德

来源：中华实验外科杂志, 2011, 28(4): 550-552.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2011.04.024

• 癌
• 肝细胞
• 多药耐药
• siRNA

目的 将表达特异性的小干扰RNA(siRNA)导人肝癌耐药细胞,干扰多药耐药(MDR1)基因后,观察其对肝癌耐药细胞化疗敏感性的影响.方法 使用浓度梯度法制作SMMC-7721耐阿霉素细胞株(SMMC-7721/ADM),阿霉素浓度从0.1～2.0 mg/L;转染siRNA(浓度25、50、75 nmol/L)沉默此耐药株MDR1基因;转染后24、48、72 h用定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞MDR1的mRNA表达水平;siRNA(浓度50 nmol/L)转染后48 h,行噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞对化疗药物的敏感性,计算各药物的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI);流式细胞仪(FCM)检测细胞对阿霉素(浓度0.2 mg/L)的凋亡.Western blot检测蛋白表达含量.结果 SMMC-7721/ADM对阿霉素、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱、奥沙利铂的RI为25.43、68.32、39.17、18.31.siRNA转染沉默MDR1基因后,发现其对上述药物的RI为5.01、17.04、4.96、1.62;qRT-PCR发现其MDR1 mRNA表达量显著降低(P＜0.05);Western blot显示其MDR1表达产物P-gp蛋白显著降低(P＜0.05);FCM发现加入阿霉素后,其细胞凋亡指数显著大于沉默前(P＜0.05).结论　用siRNA沉默SMMC-7721/ADM的MDR1基因后,SMMC-7721/ADM对化疗药的敏感性显著增加.MDR1基因与SMMC-7721肝癌细胞的多药耐药性显著相关,可通过沉默其MDR1基因来提高耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.

• 单位
  中山大学孙逸仙纪念医院