禽传染性支气管炎病毒Nsp2蛋白与宿主蛋白eIF2α的互作鉴定

作者：李念灵; 李永新; 樊顺怡; 申玉玺; 李淑芸; 夏静; 王安东; 崔敏; 韩新锋; 黄勇^*; 余松城

来源：微生物学报, 2022, 62(10): 4047-4056.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20220125

• 禽传染性支气管炎病毒
• Nsp2蛋白
• 质谱
• 免疫共沉淀
• 互作蛋白
• eIF2α

Nsp2蛋白是冠状病毒的非结构蛋白，在病毒早期感染中具有重要作用。【目的】为初步筛选可能与禽传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV) Nsp2蛋白互作的宿主蛋白，鉴定Nsp2蛋白与真核翻译起始因子2α亚基(eIF2α)的相互作用。【方法】以pCAGGs-Flag-Nsp2和pCAGGs-Flag载体转染后的鸡胚肾(CEK)细胞为研究对象，利用免疫共沉淀(Co-IP)和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术筛选出可能与IBVNsp2蛋白发生互作的宿主蛋白eIF2α，通过免疫共沉淀和间接免疫荧光试验进一步验证二者相互作用。【结果】经免疫共沉淀与质谱分析后筛选到97个可能与Nsp2蛋白互作的宿主蛋白，其中宿主抗病毒反应的关键蛋白eIF2α与Nsp2蛋白的相互作用通过免疫共沉淀和间接免疫荧光试验，表明二者存在直接互作关系，并共定位于细胞质中；此外，Nsp2蛋白表达和IBV感染都能显著提高宿主内源性eIF2α的转录水平。【结论】利用免疫共沉淀联合质谱技术筛选到CEK细胞中存在的97种可能与IBV Nsp2互作的候选蛋白，利用免疫共沉淀与间接免疫荧光证明候选蛋白eIF2α与Nsp2蛋白在细胞质中存在直接互作，同时发现Nsp2蛋白过表达和IBV感染会导致CEK细胞内eIF2α的转录水平显著增强。本研究为进一步探索冠状病毒非结构蛋白Nsp2的生物学功能奠定了基础，并提供了IBV入侵宿主时Nsp2蛋白的作用机制研究的新线索。

• 单位
  四川农业大学