人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M重组抗体制备及J链对其聚体形成的影响

作者：杜伟鹏^*; 崔亚敏; 田晓平; 王素娟; 付光宇; 赵巧辉

来源：中国医药, 2021, 16(09): 1388-1392.

• 人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M抗体
• J链
• DNA重组技术

目的体外制备人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M(TOX-IgM)抗体,并验证加入J链对Ig M抗体蛋白聚体、效价及稳定性的影响。方法从美国国家生物信息中心数据库获取抗体的重链可变区、轻链可变区以及J链序列,通过DNA重组技术分别将TOX抗体轻重链可变区和人源恒定区进行拼接,构建人鼠嵌合Ig M表达载体,转染HEK 293F细胞进行表达。观察J链相关效应。结果 J链有利于抗体聚体形成(聚体占比由11.3%提升至75.5%),抗体效价由1∶40提升至1∶160;在37℃热稳定性实验及反复冻融实验中,TOX-IgM(J+)稳定性与TOX-IgM(J-)相当。通过酶联免疫吸附试验鉴定蛋白活性,本实验成功制备人鼠嵌合TOX-IgM抗体,经聚丙烯酰胺凝胶电泳还原显示,重链大小约为75 000,轻链大小约为25 000,符合预期;效价、稳定性、基质效应均满足需求。结论在连接链J链(15 000蛋白)存在下,Ig M抗体更易形成五聚体,即5个Ig M单体通过二硫键和J链彼此之间相互连接,且经评价效价和稳定性均有了明显提升。

• 单位
  南阳市中心医院