人细胞核诱导凋亡因子1在大肠杆菌中的表达、纯化及多克隆抗体制备

作者：罗清; 赵玫; 时岚; 马怡茗; 钟佳玲; 黄常志

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2010, (01): 56-58.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.005341

• NAIF1
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 多克隆抗体

目的:构建人核凋亡诱导因子1(NAIF1)原核表达质粒,在大肠杆菌中表达及纯化NAIF1融合蛋白,制备兔抗NAIF1多克隆抗体,并对其特性进行初步鉴定。方法:PCR法获得人NAIF1序列并将其克隆到原核表达载体pET-32a中,重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达蛋白,经变性、Ni+柱亲和纯化、复性后得到纯化的重组人NAIF1蛋白,免疫大耳白兔,制备兔抗人NAIF1多抗血清,以ELISA和Westernblot方法检测其效价和特异性。结果:成功获得了高纯度的人NAIF1重组蛋白和高效价的兔抗人NAIF1多抗血清,ELISA检测多抗效价达到1∶500000,Westernblot检...

• 单位
  分子肿瘤学国家重点实验室; 中国医学科学院; 北京协和医学院