超声微泡介导T淋巴细胞Itch基因沉默增强T细胞免疫活性的研究

作者：贾启明; 魏蕾; 刘畅; 陈晓杰; 付晓敏; 张涛; 周东民^*

来源：中华超声影像学杂志, 2020, 29(10).

• 超声微泡介导破裂
• E3泛素连接酶
• 基因沉默
• T细胞
• 免疫活性

目的利用超声靶向微泡破裂(UTMD)技术介导T细胞Itch基因沉默, 观察T细胞免疫活性变化。方法磁珠分选纯化T细胞, 构建靶向Itch基因的短发夹RNA(shRNA)表达质粒。实验组为超声辐照+Itch-shRNA质粒-SonoVue微泡, 对照组为超声辐照+阴性对照shRNA质粒-SonoVue微泡, 空白组未处理。转染48 h, 荧光显微镜和流式细胞术评估细胞转染效率, 免疫印迹(Western blot)法检测Itch基因蛋白表达水平。转染72 h,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清液中白介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)水平。采用单因素方差分析比较多组间差异, 两两比较LSD-t检验。结果利用UTMD技术介导shRNA转染效率达到52.3%, 转染后实验组、对照组和空白组Itch相对蛋白表达量分别为0.301±0.080、0.773±0.101和0.719±0.090, 实验组Itch蛋白表达显著降低, 差异有统计学意义(F=24.441, P<0.01)。转染72 h, 实验组、对照组和空白组IL-2浓度分别为(417.3±37.1)ng/L、(158.7±17.3)ng/L和(147.0±10.2)ng/L, 差异有统计学意义(F=118.701, P<0.001);IFN-γ浓度分别为(168.3±12.1)ng/L、(74.3±3.7)ng/L和(74.6±7.1)ng/L, 差异有统计学意义(F=126.833, P<0.001);实验组IL-2和IFN-γ表达水平较对照组和空白组显著升高。结论利用UTMD技术介导Itch-shRNA转染能明显降低T细胞Itch水平, 增强T细胞免疫活性。

• 单位
  郑州大学; 第一附属医院心血管内科; 郑州市中心医院